血管细胞基础培养基是一种无菌、不含酚红的液体组织培养基,旨在用作完整 ATCC 原代细胞解决方案系统中的一个组件。血管细胞基础培养基旨在支持源自正常人大血管的细胞,例如人脐静脉内皮细胞、主动脉内皮细胞或主动脉平滑肌细胞,以及微血管内皮细胞。此外,为了支持血管系统细胞的增殖和铺板效率,血管细胞基础培养基必须补充适当的细胞特异性生长试剂盒。
具体应用
血管细胞基础培养基是一种无菌、不含酚红的液体组织培养基,旨在用作完整 ATCC® Primary Cell Solutions™ 系统的一个组件。
该系统旨在支持源自正常人类大血管的细胞,例如人脐静脉内皮细胞、主动脉内皮细胞或主动脉平滑肌细胞,以及微血管内皮细胞。血管细胞基础培养基含有必需和非必需氨基酸、维生素、其他有机化合物、微量矿物质和无机盐。为了支持血管系统细胞的增殖和铺板效率,血管细胞基础培养基必须补充适当的细胞特异性生长试剂盒。
该系统旨在支持源自人类心血管系统的细胞,包括以下细胞类型:
源自大血管的内皮细胞
微血管内皮细胞
源自大血管的平滑肌细胞
源自心脏的肌肉细胞
该系统旨在支持源自正常人类大血管的细胞,例如人脐静脉内皮细胞、主动脉内皮细胞或主动脉平滑肌细胞,以及微血管内皮细胞。血管细胞基础培养基含有必需和非必需氨基酸、维生素、其他有机化合物、微量矿物质和无机盐。为了支持血管系统细胞的增殖和铺板效率,血管细胞基础培养基必须补充适当的细胞特异性生长试剂盒。
原代心肌细胞;正常,人类,ATCC PCS-120-010
原代主动脉平滑肌细胞;正常,人类,ATCC PCS-100-012
原发性冠状动脉平滑肌细胞;正常,人类,ATCC PCS-100-021
原发性肺动脉平滑肌细胞;正常,人类,ATCC PCS-100-023
原代真皮微血管内皮细胞;正常、人类、新生儿、ATCC PCS-110-010
原代脐静脉内皮细胞;正常,人类,ATCC PCS-100-010
原代脐静脉内皮细胞;正常,人类,混合,ATCC PCS-100-013
原代主动脉内皮细胞;正常,人类,ATCC PCS-100-011
原代冠状动脉内皮细胞;正常,人类,ATCC PCS-100-020
原代肺动脉内皮细胞;正常,人类,ATCC PCS-100-022
庆大霉素-两性霉素 B 溶液 (ATCC PCS-999-025)
青霉素-链霉素-两性霉素 B 溶液 ( ATCC PCS-999-002 )
酚红 ( ATCC PCS-999-001 )
微血管内皮细胞生长试剂盒-BBE ( ATCC PCS-110-040 )
微血管内皮细胞生长试剂盒-VEGF ( ATCC PCS-110-041 )
内皮细胞生长试剂盒-BBE ( ATCC PCS-100-040 )
内皮细胞生长试剂盒-VEGF ( ATCC PCS-100-041 )
对于源自大血管的内皮细胞(例如,正常原代人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)、ATCC PCS-100-010、原代脐静脉内皮细胞;正常、人、混合、ATCC PCS-100-013、原代主动脉内皮细胞Cells,ATCC PCS-100-011),用以下试剂盒之一补充血管细胞基础培养基:
对于源自正常人体组织的微血管内皮细胞(例如,原代真皮微血管内皮细胞;正常、人类、新生儿、ATCC PCS-110-010),用以下试剂盒之一补充血管细胞基础培养基:
对于源自大血管的平滑肌细胞(例如,原代主动脉平滑肌细胞,ATCC PCS-100-012),用血管平滑肌细胞生长试剂盒(ATCC PCS-100-042)补充血管细胞基础培养基。
可选媒体补充:
处理程序
完整生长培养基的制备
表 1.如果使用内皮细胞生长试剂盒-BBE (ATCC ® PCS-100-040),请添加每种成分的一定体积:
成分 | 体积 | 最终浓度 |
牛脑提取物 (BBE) | 1.0毫升 | 0.2% |
重组人EGF | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
硫酸肝素 | 0.5毫升 | 0.75 单位/毫升 |
氢化可de松半琥珀酸酯 | 0.5毫升 | 1微克/毫升 |
胎牛血清 | 10.0毫升 | 2% |
抗坏血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
表 2 . 如果使用内皮细胞生长试剂盒-VEGF (ATCC ® PCS-100-041),请添加每个成分的一定体积:
成分 | 体积 | 最终浓度 |
重组人VEGF | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
重组人EGF | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
rh FGF 碱性 | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
重组人IGF-1 | 0.5毫升 | 15纳克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
硫酸肝素 | 0.5毫升 | 0.75 单位/毫升 |
氢化可de松半琥珀酸酯 | 0.5毫升 | 1微克/毫升 |
胎牛血清 | 10.0毫升 | 2% |
抗坏血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
表 3 . 如果使用血管平滑肌生长试剂盒 (ATCC ® PCS-100-042),请添加每个组件的一定体积:
成分 | 体积 | 最终浓度 |
rh FGF-碱性 | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
重组人胰岛素 | 0.5毫升 | 5微克/毫升 |
抗坏血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
重组人EGF | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
胎牛血清 | 25.0毫升 | 5% |
表 4.如果使用微血管内皮细胞生长试剂盒-BBE (ATCC ® PCS-110-040),请添加每种成分的一定体积:
成分 | 体积 | 最终浓度 |
牛脑提取物 (BBE) | 1.0毫升 | 0.2% |
重组人EGF | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
硫酸肝素 | 0.5毫升 | 0.75 单位/毫升 |
氢化可de松半琥珀酸酯 | 0.5毫升 | 1微克/毫升 |
胎牛血清 | 25.0毫升 | 5% |
抗坏血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
表 5 . 如果使用微血管内皮细胞生长试剂盒-VEGF (ATCC ® PCS-110-041),请添加每种成分的一定体积:
成分 | 体积 | 最终浓度 |
重组人VEGF | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
重组人EGF | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
rh FGF 碱性 | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
重组人IGF-1 | 0.5毫升 | 15纳克/毫升 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
硫酸肝素 | 0.5毫升 | 0.75 单位/毫升 |
氢化可de松半琥珀酸酯 | 0.5毫升 | 1微克/毫升 |
胎牛血清 | 25.0毫升 | 5% |
抗坏血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
表 6.如果使用心肌细胞生长试剂盒 (ATCC ® PCS-120-040),请添加每种成分的一定体积:
成分 | 体积 | 最终浓度 |
L-谷氨酰胺 | 25.0毫升 | 10毫米 |
胎牛血清 | 25.0毫升 | 5% |
胎球蛋白 | 5.0毫升 | 25毫克/毫升 |
重组人FGF-b | 0.5毫升 | 5纳克/毫升 |
重组人胰岛素 | 0.5毫升 | 5毫克/毫升 |
抗坏血酸 | 0.5毫升 | 50微克/毫升 |
重组人EGF/TGF-b1 | 0.5毫升 | 5 纳克/毫升,30 皮克/毫升 |
增殖不需要抗菌剂和酚红,但如果需要可以添加。表 7 总结了添加到完整生长培养基中的每种可选组分的建议体积。
从冰箱中取出一套生长套件;确保所有组件的盖子均已拧紧。
在将生长套件的组件添加到基础培养基中之前将其解冻。在添加到基础培养基之前,需要在 37°C 水浴中加热 L-谷氨酰胺组分并摇动以溶解任何沉淀物。
从冷藏处获取一瓶血管细胞基础培养基 (475 mL)。
用 70% 乙醇喷洒所有生长套件组件小瓶和基础培养基瓶的外表面,以净化它们。
使用无菌技术并在层流罩或生物安全柜中工作,使用单独的无菌移液器将表 1、2、3、4 或 5 中所示的每个生长套件组件的体积转移到基础培养基瓶中转移。
表 7.添加抗菌剂/抗真菌剂和酚红(可?。?/span>
成分 | 体积 | 最终浓度 |
庆大霉素-两性霉素B溶液 | 0.5毫升 | 庆大霉素:10 µg/mL 两性霉素 B:0.25 µg/mL |
青霉素-链霉素-两性霉素B溶液 | 0.5毫升 | 青霉素:10 单位/mL 链霉素:10 µg/mL 两性霉素 B:25 ng/mL |
酚红 | 0.5毫升 | 33微米 |
盖紧生长培养基的瓶子并轻轻旋转内容物以确保溶液均匀。请勿用力摇晃,以免产生泡沫。给瓶子贴上标签并注明日期。
完整的生长培养基应在 2°C 至 8°C 的黑暗条件下保存(不要冷冻)。在这些条件下储存时,完整培养基可稳定保存 30 天。
冷冻保存
1. 检查所有容器是否有泄漏或破损。
2. 将基础培养基保存在 2°C 至 8°C 下。不要冻结。避光。使用前加热介质时,温度不要超过 37°C。当在 2°C 至 8°C 的黑暗中储存时,产品在标签上的有效期内保持稳定。
细菌和真菌测试:没有检测到
支原体污染:没有检测到
内毒素:< 0.5 EU/毫升
渗透压:270±10毫渗透压/千克
酸碱度:7.8±0.3
功能测试:增殖率和形态
本产品仅供实验室研究使用。它不适用于任何动物或人类治疗用途、任何人类或动物消费或任何诊断用途。